fa شناسایی فیلوژنتیکی ریزجلبک ایزوله شده از سواحل جنوبی دریای خزر محيط ­زيست دريا / آلودگی دریا Marine Environment / Marine pollution مطالعه موردی Case-study <div style="text-align: justify;"><span style="font-size:12px;"><span style="font-family:IRANyekan;"><strong><span dir="RTL" style="background:#2E74B5;"><span style="color:white;">پیشینه و اهداف:<span style="background-color:#ffffff;">&nbsp;</span></span></span></strong><span style="color:#262626;">ریزجلبک&shy; ها از جمله منابع غنی از متابولیت&shy; های فعال بوده، که امروزه علاوه بر مصارف دارویی و غذایی به عنوان منابع مهم سوخت&shy; های زیستی مطرح هستند. در این تحقیق </span><span style="color:black;">از نشانگرهای ریبوزمی به جهت تعیین جایگاه فیلوژنتیکی گونه ریزجلبکی برداشت شده از سواحل جنوبی دریای خزر استفاده شد.&nbsp;</span><br> <span style="background:#2E74B5;"><strong><span dir="RTL"><span style="color:white;">روش‌ها‌:<span style="background-color:#ffffff;">&nbsp;</span></span></span></strong></span><span style="color:black;">برای مطالعات مولکولی، ریزجلبک&shy; های رشد یافته در محیط کشت سوسپانسیونی با به کارگیری محلول کلریدآهن (</span><span dir="LTR"><span style="color:black;">III</span></span><span style="color:black;">) رسوب داده شدند. پس از استخراج </span><span dir="LTR"><span style="color:black;">DNA</span></span><span style="color:black;"> ژنومی به روش ذوب و یخ، نواحی ژنی کد کننده زیرواحدهای ریبوزمی (</span><span dir="LTR"><span style="color:black;">16srDNA</span></span><span style="color:black;">) با استفاده از 36 جفت آغازگر </span>با واکنش زنجیره<span dir="LTR">&shy;</span>ای پلیمر از (<span dir="LTR">PCR</span>) <span style="color:black;">تکثیر</span> و سپس با تکنیک <span dir="LTR">TA Cloning</span> در ناقل <span dir="LTR">pTZ57R/T</span> نوترکیب شده و پس از تراریختگی در سویه باکتریایی <span dir="LTR">Dh5&alpha;</span> با خالص &shy;سازی پلاسمید&shy;های بدست آمده از روی ژل، توالی&shy; یابی&shy; شدند.<strong><span style="color:black;"><span style="font-size:14.0pt;"></span></span></strong><br> <span style="background:#2E74B5;"><strong><span dir="RTL"><span style="color:white;">یافته‌ها:<span style="background-color:#ffffff;">&nbsp;</span></span></span></strong></span>تعداد 14 جفت آغازگر تکثیر قابل قبولی از نواحی ژنی مورد هدف در ژنوم ریزجلبک نشان دادند<span dir="LTR">.</span> توالی&shy; های به دست آمده با استفاده از نرم افزار <span dir="LTR">Vector NTi ver. 11</span> ویرایش و سپس در پایگاه ژنتیکی <span dir="LTR">(NCBI)</span> بلاست گردیدند. توالی&shy; های با تشابه&nbsp; بالاتر از 90% &nbsp;انتخاب و مقایسه فاصله مولکولی داده&shy; ها با استفاده از نرم افزار <span dir="LTR">MEGA 6</span> و تحلیل&shy; های فیلوژنتیک با محاسبه درخت &shy;های مولکولی میانبرترین (<span dir="LTR">Maximum Parsimony, MP</span>) برای توالی ژن های مورد مطالعه انجام، و سپس برای آزمون میزان صحت گره&shy; ها ازشاخص بوت&shy;استرپ 1000 برای تحلیل&shy;ها استفاده گردید.<strong><span style="color:black;"><span style="font-size:14.0pt;"></span></span></strong><br> <span style="background:#2E74B5;"><strong><span dir="RTL"><span style="color:white;">نتیجه‌گیری:<span style="background-color:#ffffff;">&nbsp;</span></span></span></strong></span>نتایج حاصل از رسم درخت فیلوژنی و ماتریس تشابه با روش <span dir="LTR">Maximum Parsimony</span> برای هر 14 ناحیه ژنی نشان داد که گونه مورد مطالعه کمترین فاصله ژنتیکی را با سویه جلبکی <em><span dir="LTR">Spirulina laxissima</span></em> دارد.</span></span><span style="font-size:11px;"><span style="font-family:IRANyekan;"> <strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:14.0pt;"></span></span></span></strong></span></span></div> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#2980b9;">Background and Objectives:</span></strong></span> Microalgae are rich sources of active metabolites, which today are considered as important sources of biofuels in addition to medicinal and food uses. In this study, ribosomal markers were used to determine the phylogenetic posation of microalgae species which isolated from the southern coast of the Caspian Sea.<br> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#2980b9;">Methods:</span></strong></span> For molecular studies, microalgae grown in suspension culture medium were precipitated using iron (III) chloride solution. After extraction of genomic DNA by freez- thawing method, the gene loci encoding ribosomal subunits (16srDNA) were amplified using 36 pairs oligoes by polymerase chain reaction (PCR), the amplified gene loci were inserted into the pTZ57R /T vector by TA cloning technique then transformed in the Dh5&alpha; bacterial and sequenced follow by purification. <div style="text-align: justify;"><span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#2980b9;">Findings:</span></strong></span> Fourteen pairs of primers showed acceptable amplification of target gene in the microalgae genome. The obtained sequences were edited by Vector NTi ver. 11 software and then blasted at the NCBI. Sequences with more than 90% similarity were selected and the molecular distance of the data was estimated by MEGA 6 software and phylogenetic analyzes were performed by calculating the maximum short molecular trees (Maximum Parsimony, MP) for the sequence of the studied genes, and Then, Bootstrap 1000 index was used for analysis to test the accuracy of the nodes.</div> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#2980b9;">Conclusion:</span></strong></span> The results of phylogenetic tree and similarity matrix with Maximum Parsimony method for all 14 gene regions showed that the studied species has the lowest genetic distance with the algal strain <em>Spirulina laxissima</em>. سیانوباکتر, اسپیرولینا, ریبوزوم, طبقه بندی مولکولی, 16s DNA Microalgae, Ribosomes, Molecular classification, 16srDNAA 41 51 http://joc.inio.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1676-1&slc_lang=fa&sid=1 Noraddin Hosseinpourazad نورالدین حسین پور آزاد n.hosseinpour@uma.ac.ir 100319475328460013410 100319475328460013410 Yes 1Department of plant science and medicinal plant, Meshginshahr faculty of Agriculture, University of Mohaghegh Ardabili گروه علوم گیاهی و گیاهان دارویی، دانشکده کشاورزی مشگین‌شهر، دانشگاه محقق اردبیلی Khadijeh Fatalipour خدیجه فتحعلی پور khadijeh_f@uma.ac.ir 100319475328460013411 100319475328460013411 No M.Sc of Plant Biotechnology, Sari Agricultural Sciences and Natural Resources University دانش آموخته کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی گیاهی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری